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本试剂盒用于使用专有的裂解缓冲液从培养的哺乳动物细胞或组织提取总蛋白。提取蛋白质操作过程简单省时，可用于提取培养的哺乳动物细胞或组织，可同时处理多个样品，无需超离心。

• 在特殊情况下，当需要浓缩裂解物时，可以使用较低体积的裂解缓冲液裂解细胞。对于贴壁细胞，板尺寸将决定覆盖板表面缓冲液的量。对于悬浮液中的细胞，体积可以减少到细胞的2X体积。
  
• 如果细胞裂解缓冲液中含有所有三种洗涤剂，一些抗原可能被变性，一些蛋白质复合物可能被破坏。在这种情况下，必须仔细选择合适的洗涤剂。如果要省略一种或两种洗涤剂溶液，则使用等体积的蒸馏水来代替洗涤剂溶液。
  
• 蛋白酶抑制剂混合物适合在细胞裂解缓冲液中以1:100的稀释度使用。
  
• 在制备细胞裂解缓冲液后，在2～8℃下进行所有步骤。
  
• 操作需佩戴防护眼镜和手套，并注意安全。因为PMSF对健康有害，毒性非常大，并且对眼睛和皮肤有刺激性。本制品仅供实验室研究使用。

• 准备：根据5×Buffer，5×NaCl，5×SDS，5×DOC和5×NP-40为1:1:1:1:1(v/v)配制细胞裂解缓冲液，1mL细胞裂解缓冲液用于10⁶～10⁷个细胞或5～20mg组织的蛋白提取。使用前加入10μL蛋白酶抑制剂混合物。
  
• 洗涤细胞或组织，用细胞裂解缓冲液处理:
  
  • 对于贴壁细胞：除去需提取细胞中的生长培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，加入细胞裂解缓冲液(10⁶~10⁷个cells/ml)，然后将整个细胞完全浸入冰袋中，在摇床上孵育30分钟，阶段性将细胞在细胞裂解缓冲液中重悬几次，最后刮掉并收集裂解液。
    
  • 对于悬浮细胞：在700×g下离心5分钟，弃掉上清。用PBS重悬洗涤细胞两次，在4℃离心并去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中(10⁶~10⁷个cells/ml)，浸入冰袋，在摇床上孵育30分钟。
    
  • 对于组织：将组织切成小块，用PBS冲洗组织两次。加入细胞裂解缓冲液(5～20mg组织/ml)，将样品(含细胞裂解缓冲液)转移到预冷微量匀浆器中，并在冰上均匀化组织30～50次。注意均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。
• 4℃下，12000×g离心裂解的细胞10min来沉淀细胞碎片或者高速离心来制备蛋白质溶液，100000×g离心45分钟。
  
• 将含蛋白质的上清液移至冷冻管中。在冰上保存可立即使用或将蛋白质溶液保存在-70℃。